ELISA キットは、抗原または抗体の固相と、抗原または抗体の酵素標識に基づいています。固体担体の表面に結合した抗原または抗体は依然としてその免疫活性を保持しており、酵素標識抗原または抗体はその免疫活性および酵素活性の両方を保持している。測定時、被検物(抗体または抗原を測定するもの)は、固体担体表面の抗原または抗体と反応する。固体担体上に形成された抗原抗体複合体は、洗浄により液体中の他の物質から分離される。
酵素標識された抗原または抗体が添加され、これらも反応によって固体担体に結合します。このとき、固相中の酵素量は検体中の物質量に比例します。酵素反応の基質を加えた後、基質は酵素によって触媒され、着色された生成物になります。生成物の量は、検体中の被験物質の量に直接関係するため、色の深さに応じて定性的または定量的な分析を行うことができます。
酵素の高い触媒効率は免疫応答の結果を間接的に増幅し、アッセイを高感度にします。 ELISA は抗原の測定に使用できますが、抗体の測定にも使用できます。
ELISAキットの基本原理
抗原と抗体の特異的な反応を利用して対象物と酵素を結びつけ、酵素と基質の呈色反応を起こして定量します。測定対象は抗体でも抗原でもかまいません。
この測定方法には、次の 3 つの試薬が必要です。
â 固相抗原または抗体(免疫吸着剤)
â¡ 酵素標識抗原または抗体(マーカー)
■酵素作用の基質(発色剤)
測定では、まず抗原(抗体)を固体担体に結合させますが、免疫活性を保持しています。次に、抗体(抗原)と酵素の結合体(マーカー)を加えます。これは、元の免疫活性と酵素を保持しています。アクティビティ。コンジュゲートが固体担体上の抗原(抗体)と反応すると、対応する酵素の基質が追加されます。つまり、触媒加水分解または REDOX 反応と発色です。
その発色の濃淡は、測定する抗原(抗体)の量に比例します。この発色物は、肉眼、光学顕微鏡、電子顕微鏡で観察でき、分光光度計(酵素標識装置)でも測定できます。この方法は、シンプルで便利、迅速かつ具体的です。